来源 :迈克生物2024-03-13
随着分子生物学相关检测技术的发展，以miRNA为主的非编码RNA（ncRNA）可为组织体液鉴定[1-4]、死亡时间相关推断[5-7]、年龄估计[8-10]等提供新的策略和方法，在法医学研究中发挥重要作用。但低质量的RNA会增加基因表达分析的难度，影响研究结果[11-13]。因此RNA的完整性是成功分析转录组和获得RNA标记物准确表达数据的先决条件。
3月2日，四川大学华西基础医学与法医学院法医学研究所科研团队在ForensicScience International发表了题为“RNA quality scoreevaluation: A preliminary study of RNA integrity number (RIN) and RNA integrityand quality number (RNA IQ)”的研究论文，该研究评估了RIN值和RNA IQ值在RNA样本完整性检测中的性能，并通过迈克生物D 600全自动数字PCR分析系统评估了不同降解程度对RNA样本中3个miRNA表达水平的影响，为RNA生物标志物的分析提供了可靠的检测方法[14]。
该研究分析了热降解和RNase介导的降解样本，结果显示RIN和RNA IQ质量评分都表现出良好的重复性和重现性。在经过热降解的样品中，RIN值呈现出与加热时间对应的变化趋势，但RNA IQ值在时间梯度上几乎没有变化，因此RIN和RNA IQ质量评分存在一定不一致性；并且在RNase介导的降解样本中，RNA IQ值呈现出更好的线性。RNA降解是一个非常复杂和高度可变的过程，因此仅通过单一指标难以对其进行综合评价。
同时，研究者利用qPCR和迈克生物D 600全自动数字PCR分析系统（图a）检测了完整和严重降解RNA样本中三种miRNA（hsa-let-7g-5p、hsa-miR-93-5p和hsa-miR-191-5p）的表达水平。结果显示，与完整的RNA样本相比，严重降解的样本中三种miRNA的表达水平没有明显变化（图b），因此分析具有稳定区域或微小的RNA生物标志物对于降解程度较高的样本（例如体液斑等）是可靠的研究方式。
基于标准曲线法和依赖Ct值的间接定量方法，以及PCR抑制剂的存在使得qPCR过程繁琐且容易导致结果不稳定。而数字PCR作为第三代PCR技术，克服了qPCR的局限性，并且灵敏度更高，可直接获取目标基因的绝对拷贝数，为miRNA研究提供了更高的检测精度及分辨率，全自动的检测设备也极大降低了操作的复杂性，成为评估miRNA完整性的极具应用价值的检测新方法。
迈克生物D 600全自动数字PCR分析系统采用自主研发的振动微滴（OsciDrop?）核心专利技术，实现了核酸的绝对定量、灵敏度高、耐受抑制物干扰，并且集成了微滴生成、PCR扩增和荧光检测三大步骤，实现了“样本进、结果出”的全新模式。目前迈克生物数字PCR平台已开展30余项科研试剂产品研发，涉及肿瘤、遗传性疾病、病原体检测等疾病领域，并可提供个性化试剂定制服务，能够满足临床、科研、疾控、司法鉴定及食品安全等多应用场景的精准检测需求。